大肠杆菌检测

2025-03-27 微析研究院 微生物检测

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注：因业务调整，微析暂不接受个人委托测试。

大肠杆菌检测是生物制药领域微生物质量控制的关键项目，主要用于评估药品、原料、生产环境及医疗产品的微生物污染风险。该检测通过培养法、分子生物学技术（如PCR）或酶联免疫法，识别样品中大肠杆菌或其特定毒素（如内毒素），确保产品符合无菌及安全标准。检测范围涵盖原料药、注射用水、生物制剂、医疗器械等，依据药典和国际标准执行，可有效监控生产流程中的污染源，保障药品安全性和合规性。

大肠杆菌检测项目介绍

大肠杆菌检测旨在确认样品中是否含有大肠杆菌或其代谢产物（如内毒素），是生物制药生产过程中微生物限度和无菌检查的核心环节。

检测对象包括原料、中间体、成品、生产用水及洁净环境表面，重点关注其潜在污染对药品安全性的影响。

通过选择性培养基培养、生化鉴定或基因扩增技术，区分大肠杆菌与其他肠杆菌科微生物，确保结果准确性和特异性。

大肠杆菌检测项目种类

1、常规培养法：使用麦康凯琼脂或EMB培养基进行分离培养，结合IMViC生化试验确认

2、快速检测法：基于PCR技术检测uidA等特异性基因，或采用酶底物法（如Colilert®）实现定量分析

3、内毒素检测：通过鲎试剂法（LAL）定量分析细菌内毒素水平

4、活菌计数：适用非无菌制剂的微生物限度检查

大肠杆菌检测所需样品

• 生物制品原液及成品（如疫苗、抗体药物）

• 制药用水（纯化水、注射用水）

• 原料药（尤其动植物来源的原材料）

• 医疗器械（导管、植入物等）

• 洁净区环境监测样品（接触碟、沉降菌）

大肠杆菌检测方法步骤

1、样品预处理：液体样品直接检测，固体样品需均质化后悬浮

2、增菌培养：使用缓冲蛋白胨水或TSB在30-35℃培养18-24小时

3、选择性分离：转种麦康凯琼脂平板，35℃培养18-72小时

4、形态学鉴定：观察典型菌落特征（金属光泽、红色菌落）

5、生化确认：进行吲哚、甲基红、VP及枸橼酸盐试验（IMViC++--）

6、报告结果：结合培养特征和生化反应判定是否检出

大肠杆菌检测依据标准

1、中国药典2020版通则1105/1106（非无菌产品微生物限度检查）

2、USP <62> Microbiological Examination of Nonsterile Products

3、EP 2.6.13 Bacterial endotoxins

4、ISO 16649-3 食品链微生物学-β-葡萄糖醛酸酶阳性大肠杆菌计数

5、GB/T 5750.12-2022 生活饮用水标准检验方法

6、FDA Bacteriological Analytical Manual Chapter 4

7、ISO 21528-2 食品和动物饲料的微生物学

8、JJF 1847-2020 大肠杆菌O157:H7核酸检测试剂盒校准规范

9、GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准

10、ISO 11737-1 医疗器械灭菌-微生物学方法

大肠杆菌检测服务周期

常规培养法检测周期为3-5个工作日，涵盖预培养、确认试验及报告编制

快速PCR检测可在24-48小时内出具定性/定量结果

内毒素检测（LAL法）通常1-2个工作日完成

大肠杆菌检测应用场景

• 生物制品生产用水系统的定期监测

• 无菌制剂生产环境的动态微生物监控

• 细胞治疗产品原料的微生物负荷验证

• 疫苗等生物制剂成品放行检验

• 医疗器械灭菌效果验证

• 制药设备清洁验证中的残留污染评估