结核分枝杆菌检测

2025-03-27 微析研究院 微生物检测

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结核分枝杆菌检测是生物制药领域微生物检测的关键项目，用于鉴定药品、原料及生产环境中的结核分枝杆菌污染，确保产品安全性。该检测结合传统培养法、分子生物学技术（如PCR）和免疫学方法，可快速、精准识别病原体。检测涵盖药品原液、中间体、成品及环境样本，依据药典和ISO标准执行，服务周期因方法而异（培养法需4-8周，分子检测仅需1-3天）。其应用场景包括无菌药品生产、疫苗研发、生物制品质量控制及医院感染防控，是防控结核传播的重要技术屏障。

结核分枝杆菌检测项目介绍

结核分枝杆菌检测旨在通过微生物学技术确认样品中是否含有结核分枝杆菌复合群（MTBC），该病原体是引起结核病的核心致病菌，其检测对生物制品、细胞治疗产品及无菌药品的安全性控制至关重要。

项目采用三级检测策略：初筛通过抗酸染色快速筛查，确认阶段运用液体/固体培养法分离菌株，最终鉴定依赖基因测序（如16S rRNA或hsp65基因分析）和生化试验，确保结果特异性。

针对生物制药行业特点，检测特别关注分枝杆菌在细胞培养基、生物反应器及冻干产品中的存活能力，建立低于1CFU/10mL的检测灵敏度标准。

结核分枝杆菌检测项目种类

1、定性检测：抗酸染色镜检（Ziehl-Neelsen法）、荧光染色法

2、分离培养：罗氏培养基固体培养、MGIT 960液体培养系统

3、分子检测：实时荧光PCR（IS6110靶标）、GeneXpert MTB/RIF检测

4、药敏试验：比例法、液体培养药敏检测（一线/二线抗结核药物）

结核分枝杆菌检测所需样品

1、生物制品：细胞治疗产品、疫苗原液、血液制品

2、制药原料：动物源成分（如胎牛血清）、植物提取物

3、环境样本：洁净区沉降菌、HVAC系统冷凝水

4、医疗器械：一次性生物反应器、层析柱填料

（样品量要求：液体≥50mL，固体≥10g，环境棉拭子需浸入10mL中和剂）

结核分枝杆菌检测方法步骤

1、前处理：N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠法消化去污染

2、浓缩：离心浓缩法（3000g×15min）提高检出率

3、染色镜检：油镜下观察抗酸杆菌典型形态

4、培养接种：BACTEC MGIT 960系统培养42天，定期荧光判读

5、核酸提取：机械破壁结合磁珠法提取DNA

6、PCR扩增：采用TaqMan探针检测IS6110插入序列

7、结果确认：MPB64蛋白免疫层析试纸条验证

结核分枝杆菌检测依据标准

1、中国药典2020年版四部通则1107

2、USP<71> Sterility Tests分枝杆菌检测补充要求

3、EP 2.6.2 Mycobacteria

4、WHO Laboratory Manual for Drug-resistant TB

5、ISO 17025:2017检测实验室通用要求

6、CLSI M48-A 分枝杆菌药敏试验标准

7、GB 15987-2018 结核病诊断标准

8、ASTM E2896-12 分子检测验证指南

9、CDC Biosafety in Microbiological Laboratories

10、ICH Q5A(R1) 生物技术产品病毒安全性评价

结核分枝杆菌检测服务周期

1、快速检测：抗酸染色（2工作日）、GeneXpert（2小时）

2、常规培养：液体培养系统平均9-14天报告阳性，42天最终阴性报告

3、分子鉴定：从核酸提取到PCR结果输出需6-8小时

4、全项目检测（培养+PCR+药敏）：6-8周

结核分枝杆菌检测应用场景

1、细胞治疗产品放行检测（CAR-T、干细胞制剂）

2、生物反应器清洁验证残留检测

3、疫苗生产用宿主细胞库筛查（如Vero细胞）

4、血浆组分制品病毒灭活工艺验证

5、医院无菌制剂生产环境监测

6、医疗器械环氧乙烷灭菌效果评价