蛋白质含量测定

2025-03-26 微析研究院 生物制品检测

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蛋白质含量测定是生物制品检测中的核心项目，用于定量分析样品中总蛋白或特定蛋白的浓度，广泛应用于药品、食品、生物制剂的质量控制及研发。其原理基于蛋白质与特定试剂的显色反应（如BCA法、Lowry法）或物理特性（如紫外吸收法），通过标准曲线计算浓度。该检测对工艺优化、批次一致性评估及产品合规性验证具有关键作用，需根据样品特性选择适配方法，并严格遵循国际药典及行业标准，确保数据的准确性和重复性。

蛋白质含量测定项目介绍

1、核心目标为量化生物制品中蛋白质的绝对浓度或相对含量，涉及原料、中间体及终产品的全流程监控

2、检测结果直接影响产品效价计算、配方优化及稳定性研究等关键决策

3、涵盖酶类、抗体、重组蛋白、疫苗等多种生物活性成分的定量分析

蛋白质含量测定项目种类

1、化学法：凯氏定氮法（总蛋白）、双缩脲法（灵敏度较低但干扰少）

2、比色法：BCA法（铜离子还原）、Lowry法（福林酚试剂）、Bradford法（考马斯亮蓝结合）

3、光谱法：紫外吸收法（A280基于芳香族氨基酸吸光值）

4、荧光法：NanoOrange等荧光染料标记检测

蛋白质含量测定所需样品

1、液体样品：细胞培养上清、血清、纯化蛋白溶液，体积通常≥200μL

2、固体样品：冻干粉需明确复溶缓冲液及浓度，生物组织需提供均质处理条件

3、特殊要求：含表面活性剂样品需标注浓度，强着色样品需前处理消除背景干扰

蛋白质含量测定方法步骤

1、样品预处理：离心去除颗粒物，复杂基质需进行透析或沉淀纯化

2、标准曲线制备：使用BSA或特定标准品建立5-7个浓度梯度

3、反应体系构建：按方法要求精确控制试剂添加比例及孵育时间（如BCA法需60℃水浴30min）

4、信号检测：分光光度计读取特定波长吸光值（BCA法562nm，Bradford法595nm）

5、数据校正：扣除空白对照，非线性拟合计算样品浓度

蛋白质含量测定依据标准

1、GB 5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定

2、ISO 20483:2013 谷物与豆类 氮含量测定和粗蛋白含量计算

3、USP-NF <1057> 生物技术衍生蛋白含量测定指导原则

4、EP 10.0 2.5.33 蛋白质含量测定（紫外分光光度法）

5、ChP 2020 生物制品蛋白质含量测定法

6、AOAC 984.13 婴幼儿配方食品中蛋白质含量测定

7、ASTM D5713-14 重组蛋白制品的蛋白质定量标准方法

8、ICH Q6B 生物技术产品质量标准：蛋白质定量方法验证要求

9、JP 18 一般试验法 蛋白质定量法

10、WHO TRS 978 Annex4 疫苗制品蛋白质含量检测规范

蛋白质含量测定服务周期

1、常规检测（Bradford/BCA法）：1-3个工作日（含方法验证）

2、凯氏定氮法：5-7个工作日（含消化、蒸馏等耗时步骤）

3、复杂样品检测：需延长至7-10日（包含样品前处理及方法开发）

蛋白质含量测定应用场景

1、生物药物质控：单克隆抗体浓度标定、疫苗抗原含量测定

2、食品营养标签：乳制品、婴幼儿配方食品的蛋白质含量验证

3、诊断试剂研发：校准品/质控品的蛋白基准值确定

4、细胞培养监控：生物反应器中蛋白表达量动态追踪

5、纯化工艺开发：层析洗脱峰蛋白回收率计算